Gamma- Interferón en la detección de Tuberculosis Bovina.

                                                         INDICE.-

 

1.- Antecedentes.

 

2.- Regulación de su empleo en la Unión Europea: Usos autorizados y no autorizados.

 

3.- Perspectiva legal dentro de la Unión Europea.-

 

4.- Experiencias y lecciones aprendidas con el uso del gamma- interferón.

 

5.- Uso en España.- La denuncia de ANEMBE ante el MAGRAMA en 2014 y el dictamen de Gormley y Dela Rua sobre el empleo del gamma- interferón.

 

6.- La persistencia en el empleo desproporcionado e inadecuado del gamma- interferón y de pruebas e interpretaciones en rebaños no infectados de Tuberculosis Bovina en ciertas comunidades autónomas españolas desde 2014.

 

7.- Uso estratégico del Gamma- Interferón frente a Tuberculosis Bovina.7.1. Ensayo del gamma- interferón visto por la OIE.

 

7.2.-¿Porqué las pruebas de diagnóstico de la Tuberculosis Bovina necesitan estar aprobadas?

 

7.3.- Ventajas.-

 

7.3.1.- Bienestar animal y seguridad del personal.- - Tercero: Momento de extraer la sangre del animal en función de la inoculación de la Tuberculina como forma de mejorar el diagnóstico..

 

7.3.2.- Objetividad en los resultados. Evitar el fraude.

 

7.3.3.- Sensibilidad superior-- Cuarto.- Grado de acuerdo con la prueba de la Tuberculina "Intradermotuberculinización"-

 

7.3.4.- Acortar cuarentenas por Tuberculosis Bovina y recuperar la calificación tras un brote-

 

7.4..- Inconvenientes- Inespecificidad; "Falsos Positivos"; Relacionada con el animal: Animales jóvenes, Reacciones cruzadas otras Micobacterias, Mycobacterium Spp. Animales jóvenes, Fasciola Hepática, Inespecificidad; "Falsos Positivos"; Relacionada con el animal: Animales jóvenes, Reacciones cruzadas otras Micobacterias, Mycobacterium Spp. Animales jóvenes, Fasciola Hepática,

 

8.- Momento de extracción de la sangre si se hace en paralelo o serie y como podría afectar al resultado

 

9.- Correlación, concordancia o grado de acuerdo con la prueba de la piel como signo de eficiencia diagnóstica.-

 

10.- Uso en paralelo o en serie de la prueba auxiliar gamma- interferón.

 

11- Modificación del punto de corte y antígenos definidos o específicos; clave para las pruebas DIVA que permitan la vacunación de Tuberculosis y Paratuberculosis y para la mejora en todo caso de la precisión diagnósticA.

 

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1.- Antecedentes

 

Ante cierta pregunta escrita hecha por la eurodiputada irlandesa del Grupo Popular Europeo Avril Doyle a la Comisión en el año 2000 ( 1 )            en la que se ponía de manifiesto la falta de actualización científica de la Directiva en cuanto al uso del gamma- interferón; la Comisión recordaba que Dinamarca, Alemania, las Provincias de Bolzano y Trento en Italia, Luxemburgo, los Países Bajos, Austria habían conseguido ser reconocidos como estados oficialmente libres con la prueba cutanea de la Intradermotuberculinización. Según el catedrático D. Juan Francisco García Marín, Alemania lo logró en solo una década y partiendo de un 70% de prevalencia, según comentaba para la revista AFRIGA en el congreso de ANEMBE 2016 ( 2 )

 

La Comisión en su respuesta a esa pregunta, en mayo de 2000, explica que dispone del documento SANCO B3/R10/1999 ( 3 )         "Modificación de los Anexos de la Directiva 64/432/CEE del Consejo para tener en cuenta los avances científicos en materia de tuberculosis, brucelosis y leusosis bovina enzoótica." elaborado por el Comité Científico Veterinario y que por la potestad que le confiere el artículo 16 de esa Directiva se estaba planteaba esta modificación que finalmente se materializó al publicarse el Reglamento 1226/2002 de 8 de julio ( 4 ).            El Ministerio de Agricultura español, en 2006 seguía justificando que no lo empleaba por falta de recursos ( 5 )         y comienza a usarlo con profusión desde 2014.

 

En este documento SANCO B3/R10/1999, el Comité estimaba que «debería promoverse la aceptación de este ensayo de diagnóstico como una prueba oficial suplementaria para la tuberculosis a fin de permitir su uso en el marco de las condiciones locales en programas específicos de erradicación». Australia, Nueva Zelanda y Estados Unidos llevaban años empleaban ya esa prueba en esas circunstancias

 

2.- Regulación de su empleo: Usos autorizados y usos no autorizados.

 

Para comprender los usos que pudieran darse al gamma- interferón, deben conocerse los usos para los que el kit "BOVIGAM® Mycobacterium bovis Gamma interferon test kit for cattle 1" de PRIONICS AG, fué aprobado por la Comisión de Normas Biológicas de la OIE para su inclusión en el Registro de kits de diagnóstico validados y certificados por la OIE y autorizado para su uso en todo el mundo desde 2015 ( 6 )       ; esto es.-

 

  • 1. Demostrar la ausencia histórica de infección;

  • 2. Restablecer el estatus libre tras un brote;

  • 3.Certificar la ausencia de infección o del agente patógeno en cada animal o en los productos con fines de intercambios comerciales o desplazamientos internacionales;

  • 4. Erradicar la infección dentro de una población determinada;

  • 5. Realizar un diagnóstico de confirmación de los casos sospechosos o clínicos (incluye la confirmación de los resultados positivos durante una prueba de detección);

  • 6. Estimar la prevalencia de la infección para facilitar el análisis del riesgo (encuestas/programas sanitarios en los rebaños/control de enfermedades);

  • 7. Realizar una prueba adicional para la erradicación de la tuberculosis.

 

En el documento SANCO 10200/2006, ( 33 )        el subgrupo en Tuberculosis Bovina de la Unión Europea "TASK- FORCE" se pronuncia sobre la necesidad de que el rebaño esté infectado para ser empleado de ésta forma.

 

"El ensayo de IFN-γ no se debe considerar para su uso como una prueba de detección de rutina en áreas o regiones donde la prevalencia manada es baja"

 

Dentro de la Unión Europea, el panel de la AHAW de la EFSA, en su documento 2975/2012 "Opinión científica sobre el uso de una prueba de interferón gamma para el diagnóstico de tuberculosis bovina" ( 7 )         concluye que:

 

  • Las pruebas de interferón gamma basado derivado de proteína purificada pueden ser incluidos entre las pruebas oficiales para el propósito de demostrar la libertad.

  • Algunos resultados sugieren que la especificidad de las pruebas gamma interferón basados derivado de proteína purificada no siempre puede ser tan alta como la prueba de la tuberculina intradérmica sola.

  • En caso de que se incluye la prueba, los protocolos para su uso para este propósito deben ser armonizadas en la UE.

  • La evaluación adicional de la idoneidad de la prueba de las pruebas de interferón gamma debería estudiar la influencia de factores tales como la presencia de micobacterias ambientales, la prevalencia de la tuberculosis bovina en el rebaño,

 

El grupo de la AHAW de la EFSA, en el reportaje técnico de la reunión técnica sobre Tuberculosis Bovina habida en Parma el 21 de de febrero de 2012 con objeto de poner en común las diversas condiciones incluidas en los programas de Tuberculosis de diversos paises de la UE, ( 8 refª a)         cuando expone el caso del uso del gamma-interferón en España dice.-

 

"IFN-γ prueba BA (gamma- interferón) en España se utiliza como una prueba complementaria en paralelo con la prueba de la piel en todos los rebaños infectados confirmados para la detección del número máximo de los animales infectados y, hasta ahora, sobre 180.000 prueba de IFN-γ que se han realizado."

 

En idéntico sentido en cuanto a su uso en rebaños infectados y mostrando contrariedad con los usos previstos en España, se pronuncia el Tribunal de Cuentas de la Unión Europea en su auditoría al programa español hecha en 2016 ( 9 ) .-        "...en algunas CC. AA. la utilización de IFN-gamma va más allá de lo recomendado por el programa aprobado. Por ejemplo, en Castilla y León, se utiliza el IFN-gamma paralelamente a cada repetición de la IDTB hasta que los resultados de las pruebas de todos los animales del rebaño sean dos veces en ambos ensayos negativas, mientras que en Andalucía la prueba de IFN-gamma se usa inmediatamente después de la detección de reactores a la IDTB, sin esperar la confirmación de la presencia de M. bovis."

 

También la Junta de Andalucía estima su uso para rebaños infectados, cuando explica en su documento Preguntas y Respuestas ( 10 )         sobre Tuberculosis Bovina que.-

 

"Al ser una prueba más sensible, existe una mayor probabilidad de eliminar animales sanos en la explotación, pero cuando se emplea en explotaciones infectadas, debemos utilizar todas las herramientas posibles para mejorar la sensibilidad, y se compensa el mayor número de animales sacrificados con la reducción del riesgo de dejar animales infectados"

3.- Perspectiva legal dentro de la Unión Europea.-

 

Desde la pespectiva legal, dentro de la Unión Europea, y en contraposición a las interpretaciones y usos oficiales de las pruebas que son menos exigentes y vienen regulados por los puntos 2.2.5.3.1. y 2.2.5.3.2. del Anexo B de la Directiva 64/432/CEE ( 11 )        ; esta prueba de diagnóstico está indicada para rebaños infectados.

 

Su empleo se permite a los Estados miembros en el punto 3 del Anexo B, como prueba suplementaria a la de la piel o "intradermotuberculinización", para "permitir la detección del máximo número de animales infectados o enfermos de una explotación o una región". Para éste fin tambien se permite el empleo de interpretaciones severas de las pruebas reguladas en el punto 2.2.5.3.5. por el que los dudosos son positivos, criterio empleado también para el comercio intracomunitario de animales regulado por el punto 2.2.5.3.4.

 

Al no ser una prueba oficial para el comercio, la presencia de positividad ante esta prueba no debe repercutir la calificación sanitaria. En el manual de procedimiento para la realización de la prueba de comparación y gamma- interferón ( 12 )         se explica que la recomendación 13/03/2002 del subgrupo en Tuberculosis Bovina de la UE pasa por asociar la calificación del rebaño a la intredermotuberculinización.

 

4.- Experiencias y lecciones aprendidas con el uso del gamma- interferón.

 

# En el documento "Actualización del Programa" del Servicio de Inspección Veterinaria del departamento de agricultura de los Estados Unidos (USDA) de octubre 2017 ( 13 )         se comenta profundas discrepancias en el rendimiento del gamma- interferón y se anuncia que se deja de emplear desde 2017 pues.-

 

  • Enero 2015-julio 2015, la detección, la investigación y el descubrimiento de los lotes de baja actividad (# 201 y # 301) de CSL PPD en kits comerciales

  • 1 de agosto de 31 2015-agosto de 2016, la aplicación no kit de componentes de fila de prueba incluyendo Lelystad PPD ▪ Muy alto e inesperado tasa de falsos positivos observados

  • septiembre 2016-12 mayo 2017, la sustitución de Lelystad PPD con una NVSL PPD ▪ Baja e inesperada sensibilidad observada en los rebaños afectados de TB-conocidos

  • 13 de mayo de 2017 hasta la actualidad, el uso de interferón gamma suspendido ▪ Las actividades en curso para restaurar la utilización de pruebas en NVSL, oficinas en el terreno, y CHC

 

NVSL= Servicios Nacionales (Laboratorios) de Estados Unidos. Gamma- Interferón empleado por o (PPD) perteneciente a.

 

## En el reportaje técnico de la reunión técnica de la Red Científico de la EFSA para la evaluación del riesgo en Salud y Bienestar Animal - bovina Tuberculosis habida en Parma el 21 de de febrero de 2012 ( 8 ) se comenta.-

 

  • doc 8 Refª b.- Experiencia negativa sobre su uso en Hungría, "Hasta ahora prueba BA IFN-γ (gamma- interferón) se ha utilizado en un bajo número de rebaños: la razón es el alto costo que tiene que ser cubierta por el agricultor y la falta de acuerdo con los resultados de la prueba SICCT." (Intradermotuberculinización comparativa"

 

"Desde 2010, la prueba SICCT se recomienda como primera prueba en rebaños con un alto número de reactores no confirmados."

  • doc 8 Refª c.- Experiencias positivas en Irlanda.- "En 2009, la estrategia de ensayo se modificó y en lugar de los animales de prueba rutinaria de rebaños de alto riesgo (reactor re-tests), los veterinarios tuvieron que dirigirse a las cohortes de alto riesgo en los rebaños infectados y para justificar la prueba de IFN-γ en estos grupos en función de sólidos principios epidemiológicos. Una consecuencia natural es que desde 2009 la proporción de casos positivos aumentó (33%) a pesar de que el número de pruebas disminuyó y la prevalencia nacional tuberculosis esta disminuyendo cada año."

En 2010, se ensayaron 5541 animales. 1138 fueron positivos en la primera prueba de la piel. Hubo una correlación 79% entre los animales positivos prueba cutánea positiva y IFN- gamma. De 287 animales con lesiones clínicas, 257 (90%) también eran IFN-γ positivo.

### Experiencia negativa sobre su uso en Alemania en 2013. Tras varios brotes y la implementación de un programa con Bovigam 1; la falta de confirmación en un 80% de los positivos, la falta de concordancia con la prueba de la piel y la falta de acuerdo entre los distintos laboratorios donde se probaba la mismas muestras de sangre hicieron desistir de su empleo, volviedo a emplear la Prueba Intradermotuberculinización de Comparación. ( 14 )

 

"El éxito de un programa de control de la tuberculosis bovina depende de varios factores como ocurrencia de un anfitrión de la fauna, la correcta identificación de infectado o no infectado los animales y la participación de todos los interesados (Collins, JD, 2006; Corner, L. IV. Discusión 71 AL et al., 2011; Bueno, M., 2011; Waddington, K., 2012). Para la participación de todos los interesados, especialmente los propietarios de la manada, el diálogo y la comunicación de riesgos es fundamental (Collins, JD, 2006;. Cowie, CE et al, 2015). Por lo tanto las pruebas de diagnóstico con alta especificidad son importantes, como un sacrificio frecuente de los animales que se encuentran más adelante diagnosticado como negativo dará lugar a la insatisfacción y la incertidumbre sobre el propietario del sitio. Esto podría conducir a una mala comunicación entre las personas que ponen a prueba los animales y el propietario del hato, como las experimentadas por algunos veterinarios que participan en el bovino programa de TB (Pucken, V.-B. et al., 2015). Debido al hecho de que para la Bovigam® Ensayo de una baja especificidad extrema se estimó, algunos propietarios de la manada eran confrontado con los animales que han sido sacrificados pero fueron posteriormente diagnosticados TB bovina negativo. Esto puede haber causadola desconfianza en las pruebas de ensayo y premortales ejecución y podría ser la causa de la discusión sobre el lugar de la inyección de la pruebas de tuberculina intradérmica y cambiante de la cánula después de cada animal 10 (Anónimo, 2013; 2014; 2015). Por lo tanto una ejecución uniforme de las pruebas utilizadas dentro de un programa de control de la tuberculosis bovina es crucial y una directriz publicada como con el primer documento podría ayudar a los médicos para una ejecución más estandarizado de la pruebas de tuberculina intradérmica"

 

"Donde un total de 175 animales ensayados 115 fueron diagnosticados positiva sólo con el Bovigam 1 ensayo. Para nuestro conocimiento tales especificidades bajas nunca fueron reconocidos antes de la Bovigam 1 ensayo.""...Esto fue especialmente interesante como las personas que participan en este programa de pruebas reconocido los resultados de las pruebas contradictorias para la Bovigam 1 ensayo que dio lugar a la desconfianza y la terminación de la prueba con el Bovigam 1 ensayo

 

Y se demostró que menos del 20% de los animales dio positivo en el Bovigam 1 ensayo también fueron positivos en cultivo o patología [ ]. Van Dijk [ ] Mostró que la Bovigam 1 ensayo es probable que tenga resultados positivos falsos y esto en una cantidad mayor que la prueba SICCT. Con una disminución de la prevalencia de la cantidad de resultados de la prueba falsos positivos incluso aumenta [ ].

 

La correlación entre la estación y la aparición de micobacterias saprofitas podría estar asociado con esta [ ]. Por otra parte, las infecciones con Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis ( MAPA) puede dar lugar a resultados falsos positivos para el Bovigam 1 ensayo [ ].

 

CONCLUYE "Estos resultados podrían deberse a las influencias que afectan el medio ambiente o el sistema inmunológico de la vaca. También los factores que están asociados con el procedimiento de prueba y los laboratorios elegidos podrían haber tenido un efecto. Por lo tanto, el cambio en el régimen de pruebas de ensayo hacia SICCT como única prueba ante mortem era correcta y fundada. A pesar del hecho de que el Bovigam 1 ensayo ha sido más avanzada, es muy recomendable una evaluación de la prueba previa antes de programas de vigilancia futuros."

 

En España se ha publicado en 2018 un trabajo ( 15 )         con datos de bovinos españoles referentes a las campañas 2015 y 16, por algunos componentes del centro VISAVET de la Universidad Complutense de Madrid, en el que se pone de manifiesto la ausencia de una evaluación del rendimiento del nuevo kit comercial IDvet que el Ministerio de Agricultura ha autorizado para su uso. Aún siendo un estudio comparativo entre el resultado del IDvet y otras pruebas y por tanto sin tener en cuenta si el animal está o no infectado, concluye que la sensibilidad podría ser más limitada que la del kit Bovigam 1 autorizado por la OIE.

 

"Recientemente, un nuevo IDvet comercial IFN γ ensayo ha sido autorizado para su uso en el programa, pero las evidencias científicas son limitadas sobre su desempeño en diferentes contextos epidemiológicos"

 

"La evaluación de la precisión de la prueba (es decir, la sensibilidad, Se y especificidad, Sp) es un reto cuando el estado de infección no puede ser determinado porque, por ejemplo, una prueba de referencia perfecta no existe o es demasiado invasivo para su uso generalizado, como es el caso para bTB, en el que la prueba de referencia habitual, el aislamiento del agente causante, es costoso, lento y tiene una muy limitada la sensibilidad en una gran proporción de los animales infectados ( 4 ). análisis de clase latente es un enfoque moderno para la estimación de la precisión de las pruebas de diagnóstico en ausencia de una prueba perfecta de referencia ( 20 , 21 ). En el análisis de clase latente bayesiano, los parámetros (por ejemplo, las sensibilidades, especificidades, y prevalencias) puede estimarse mediante la combinación de un conocimiento previo con la información de los datos actuales. modelos de clase latente bayesianas se han utilizado para estimar el rendimiento diagnóstico de A menudo revelando discrepancias importantes entre los conocimientos previos y los datos del estudio."

 

Otras experiencias positivas y negativas del uso del gamma- interferón en Irlanda son comentadas en su programa 2016 2018. ( 16 )

 

"Se continúa utilizando el ensayo de interferón-gamma está dirigido principalmente hacia los rebaños clasificadas como de alto riesgo, donde el ensayo es de beneficio particular si la prueba de la tuberculina se ha podido resolver rápidamente el problema o donde la despoblación completa de una manada sería la única alternativa. La experiencia ha demostrado que el uso estratégico de las pruebas gamma a menudo puede ser tan eficaz como la despoblación manada completa en cuanto a la limpieza de una manada de infección sin la necesidad de matar animales no infectados sanos."

 

 

"El ensayo de interferón gamma también se utiliza en condiciones prácticas de campo como un complemento de la prueba de la tuberculina en bTB infectado rebaños."

 

"Experimentalmente, el uso de ensayo de Gamma interferón también se evaluó en rebaños que podrían estar expuestos. Sin embargo, aunque se sigue utilizando como un complemento a la prueba cutánea en los rebaños de alto riesgo, no resultó adecuado, por razones de especificidad, para su uso como una prueba de selección alternativa en los rebaños contiguos."

 

"El ensayo Gamma interferón -en el programa irlandés- también se utiliza para fines de control de calidad y de correlación en una muestra de reactores SICTT (Intradermotuberculinización)"

 

5.- Uso en España.- La denuncia de ANEMBE ante el MAGRAMA en 2014 y el dictamen de Gormley y Dela Rua sobre el empleo del gamma- interferón.

 

En España, la Asociación Nacional de Médicos Clínicos Veterinarios -ANEMBE-, tras conocer un artículo sobre Factores de Riesgo y Falsos Positivos en el uso del Gamma- Interferón en febrero de 2014 y presentar reclamación de información al Ministerio, consultan de forma conjunta información más explícita a sus autores -Gormley y Dela Rúa- que responden.-  ( 17 ) .-

 

  • "La especificidad del test en Irlanda es del 90,77 %, pero que varía en función de factores locales entre un 5 y un 18% y en función de la edad, entre un 8 y un 11%,". Por ello, en determinadas situaciones su especificidad puede bajar desde la estimada en la prueba comparada en que puede esperarse un 0,5% de falsos positivos a un 30% con el gamma- interferón.

     

  • "No creemos que la especificidad del gamma- interferón en Irlanda pueda ser extrapolada a otros paises. Puede haber factores locales que le afecten. La especificidad debe estimarse en la zona donde se aplique la técnica."

     

  • "Interpretamos los resultados teniendo en cuenta la investigación epidemiológica del rebaño infectado, la fuente de infección, los resultados de la Tuberculina, los antecedentes de enfermedad en el rebaño y colindantes. Es dificil interpretar un punto de corte para esta prueba, pues no hay un gold- estandar."

     

  • "La especificidad del gamma- interferón en Irlanda (90%), considerablemente inferior que la de la Tuberculina Comparada" (99,5%)

 

De la Rúa en 2015, añadia.-

 

  • "Según baja la incidencia tendremos que modificar el test, los usos, la interpretación, la inclusión de antígenos específicos para adaptarlo a los nuevos niveles de enfermedad."

     

  • "Estamos investigando la posibilidad de incrementos de Falsos Positivos en rebaños con baja prevalencia y según progresemos y la proporción de animales enfermos disminuya es más dificil interpretar los resultados del gamma- interferón y será mas dificil distinguir los Falsos Positivos."

 

ANEMBE termina redactando un escrito, que remite al MAGRAMA donde solicitan.-

 

  • Emplear el gamma- interferón exclusivamente en rebaños donde se haya comprobado la existencia de la enfermedad.

     

  • Además de positividad en las pruebas de inmunidad celular, debe confirmase en laboratorio por cultivo.

     

  • La presencia de lesiones macroscopicas compatibles no es suficiente para el diagnóstico.

     

  • La IDTB simple proporciona valores altos de sensibilidad y especificidad, pero si hay sospecha de interferencias, está documentado y pedimos poder emplear la comparada.

     

  • Comunicar los resultados (de la confirmación diagnóstica) de las campañas de saneamiento al veterinario de explotación o ADSG, por el riesgo de contagio en caso de presencia de enfermedad.

     

  • Determinar la especificidad real del gamma- interferón teniendo en cuenta interferencias, diversidad geográfica, sistemas de explotación y manejo tan diversas en nuestro pais

 

6.- La persistencia en el empleo desproporcionado e inadecuado del gamma- interferón y de pruebas e interpretaciones en rebaños no infectados de Tuberculosis Bovina en ciertas comunidades autónomas españolas desde 2014 . ¿Un caso de negligencia?

 

En el documento informativo de la Junta de Andalucía ( 10 ) se comentaba sobre la necesidad de presencia de infección frente a Tuberculosis Bovina confirmada en el rebaño para disponer el gamma- interferón, sin embargo, desde 2013, ciertos criterios diagnósticos en ciertas regiones españolas como Andalucía sufren un espectacular vuelco en cuanto al rigor diagnóstico, de modo que vemos como.-

 

  • La prueba "Intradermotuberculinización simple" se comienza a hacer en el cuello en lugar de en el hombro, ( 18 )        tal como hasta entonces se había venido haciendo y como recoge la verión italiana ( 19 )        o española ( 20 )        de la Directiva 64/432 ( 11 ). Así podemos decir que se pasa de hacer la IDTBs o simple a hacer la Prueba Cervical Simple, prueba reservada generalmente a rebaños infectados ( 21 ).

     

  • En toda América, Australia, Nueva Zelanda...se practica la "Caudal" en la base de la cola por ser más específica la reacción, pues mientras la cervical tiene un 90% de especificidad, la segunda tiene entre un 95% y un 98%. ( 21 b).        Esta prueba "Caudal" fué incluida por el Comité Científico Veterinario como una prueba de rutina o choque al igual que la simple o comparada en su propuesta de modificación del Anexo B de la Diretiva 64/432/CEE, pero se descartó por ser menos sensible. ( 3 )

      Esta prueba "Caudal" fué incluida por el Comité Científico Veterinario como una prueba de rutina o choque al igual que la simple o                  comparada en su propuesta de modificación del Anexo B de la Diretiva 64/432/CEE, pero se descartó por ser menos sensible. ( 3 )

  • El criterio de interpretación de las pruebas intradérmicas que requiere la repetición de los dudosos del punto 2.2.5.3.1 del Anexo B de la Directiva ( 11 ) cambia. Desde entonces y aún en rebaños de reproducción o leche que no son objeto de movimientos ni intercambios comunitarios se emplea el régimen severo de interpretación por el que los dudosos son sacrificados si hay algún positivo ( 22 )       o incluso desde el primer momento. ( 23 )

     

  • Desde 2014, la Junta de Andalucía, que dice basarse en recomendaciones científicas y admite ir más allá del programa aprobado ( 24 ),             como reconoce el Tribunal de Cuentas de la Unión Europea ( 9 ) comienza a emplear la prueba del gamma- interferón en rebaños no infectados y no solo como prueba de choque, sino de forma ininterrumpida sin comprobar no antes ni después de sacrificar los animales si la positividad venía de otras causas diferentes de Tuberculosis Bovina;

     

Por otro lado, el abuso que hace España de esta prueba de diagnóstico, se evidencia en la cantidad de test que se hacen en éste pais si lo comparamos con paises de nuestro entorno legal y epidemiológico. Si hasta 2013, España venía haciendo unas 150.000 test al año -5 veces las que emplea Irlanda con mayor censo y nivel de enfermedad- a partir de 2014 pasa a hacer 250.000 e incluso en 2018 llega las 300.000 ( 25 )        -12 veces más que Irlanda ( 26 )        y el triple que Inglaterra,    ( 8 )  pais donde la enfermedad causa auténticos estragos. Otros paises como Italia o Portugal hacen unas 1000 pruebas al año y Estados Unidos una media de unas 10.000 durante los últimos 12 años. ( 13 

7.- Uso estratégico del Gamma- Interferón frente a Tuberculosis Bovina

 

Mediante ésta denominación viene incluyendo el grupo de trabajo en Tuberculosis Bovina o TASK- FORCE de la Unión Europea un capítulo en sus documentos de trabajo para tratar el uso de ésta prueba de diagnóstico.

 

7.1. Ensayo del gamma- interferón visto por la OIE.

 

El test aprobado en la Unión Europea se refiere al descrito en al Manual de Test Disgnósticos y Vacunas para Animales Terrestres de la OIE (OIE, 2015) De la descripción de ensayo, ( 27 )        extraigo algunas partes como.-

 

*Debido al coste y la naturaleza más compleja de las pruebas de laboratorio, se suelen usar como pruebas de apoyo para confirmar o negar los resultados de la prueba intradérmica.

* Esta prueba compara la producción de gamma interferón tras la estimulación con PPD bovina y aviar. * En algunas zonas, especialmente en las que prevalece la “inespecificidad”, se han manifestado dudas sobre la precisión. * El uso de antígenos definidos de micobacterias como ESAT 6 y CFP-10 promete mejorar la especificidad (5). La utilización de los mencionados antígenos también puede servir para diferenciar entre los animales vacunados y los no vacunados. * Nueva Zelanda y Australia. En Nueva Zelanda, la prueba IFN-γ se utiliza en las pruebas seriadas (para mejorar la especificidad) y las paralelas (para mejorar la sensibilidad).

 

7.2.-¿Porqué las pruebas de diagnóstico de la Tuberculosis Bovina necesitan estar aprobadas?

 

La Agencia para la Salud Animal y Vegetal de Reino Unido (APHA) responde a ésta pregunta en un documento informativo sobre la enfermedad. ( 28 )

 

  • Las pruebas de diagnóstico deben de estar plenamente validadas según las directrices de la OIE, por lo que podemos interpretar los resultados que generan.

  • La validación (ante la OIE) implica múltiples pasos para evaluar las características de rendimiento diagnóstico de la prueba.

  • La prueba también debe demostrarse que es repetible y estandarizada.

  • Las pruebas de la Tuberculosis Bovina deben ser aprobadas por la legislación de la UE para fines comerciales y establecer el estado de enfermedad oficial de rebaños.

 

7.3.- Ventajas.-

 

7.3.1.- Bienestar animal y seguridad del personal.-

 

-7.3.1.1- OIE. Manual Terrestre 2015. Capítulo 2.4.6.-

 

"Para animales de manejo difícil o peligroso, como el ganado bronco o bravo u otros bóvidos, la ventaja de la prueba IFN-γ sobre la prueba cutánea consiste en que sólo necesitan ser capturados una vez". "El uso de pruebas basadas en sangre presenta ventajas, en especial con ganado bravo, con animales del zoo o salvajes" ( 27 )

 

- 7.3.1.2- EFSA. Opinión 2975/2012 Punto 4.6. cuestiones práticas gamma- interferón.-

 

"Además, ya que no requiere una segunda visita a la finca para leer la prueba, esto puede tener un impacto beneficioso sobre la carga de trabajo, la seguridad del personal y el bienestar de los animales a través de la manipulación reducida y minimizando los niveles de estrés." ( 7 )

 

7.3.2.- Objetividad en los resultados. Evitar el fraude.-

 

- 7.3.2.1.-EFSA. Opinión 2975/2012 Punto 4.6. cuestiones práticas gamma- interferón.- "La aplicación del ensayo de IFN-γ para detectar M. bovis infección en el ganado ofrece varias ventajas prácticas sobre la prueba cutánea. Los problemas asociados con las pruebas de la piel de los animales, incluidas las malas instalaciones, equipos calibrados deficientemente y la posibilidad de fraude, se reducen cuando se realiza la prueba basada en la sangre"..."La adopción de criterios de interpretación basado en valores cuantitativos permite una interpretación más objetiva de los resultados en contraste con la interpretación más subjetiva de los resultados de las pruebas cutáneas"

 

- 7.3.2.2- EFSA. Reportaje técnico sobre pruebas diagnósticas Tuberculosis Bovina reunión Parma 2012. ( 8 ) Empleada para evitar el fraude en serie en Reino Unido e Italia.

 

- 7.3.2.3.- Programa erradicación de Córdoba para 2006, ( 29 )         la Junta de Andalucía se pronuncia sobre su uso

 

"En circunstancias especiales, cuando el ganadero quiera avanzar más rápidamente en el programa de erradicación de la tuberculosis bovina, o se sospeche de la posible manipulación de la técnica de la intradermotuberculinización, se podrán efectuar tomas de muestra de sangre completa en tubo estéril con anticoagulante (heparina) en rebaños a los que se repita la prueba de diagnóstico.".

 

- 7.3.2.4.- Criterios de VISAVET de la Universidad Complutense se dice que es menos subjetiva

 

"Interpretación menos subjetiva e influenciable por causas que interfieren con la IDTB." ( 30)

"Interpretación menos subjetiva..." ( 31 )

 

- 7.3.2.5.- Estudio sociológico de campo; "Actitudes de los ganaderos y veterinarios frente al programa de erradicación de la Tuberculosis Bovina en España. ¿Qué está pasando en el campo? (Andalucía y Cataluña 2017) Ficha donde se publican las respuestas más representativas del estudio. ( 32 )

 

* S9.- "Claro al meter el tema del gamma- interferón han aparecido no más sino lo que había (...) (Veterinario Oficial)

* S10.- "(...) si yo tengo duda...el interferón me saca de dudas ¿entiendes? (Veterinario Privado)

 

7.3.3.- Sensibilidad superior-

 

- 7.3.3.1.- EFSA. Opinión 2975/2012 ( 7 ) Resumen.-

 

"La probabilidad de que un animal o un rebaño esté libre de infección cuando un resultado negativo se obtiene de la prueba de IFN-γ es al menos tan alta como cuando se obtiene un resultado de la prueba cutánea negativa." (Por tanto es más sensible)

 

 

- 7.3.3.2- TASK FORCE subgrupo Tuberculosis Bovina. SANCO 10200/2006 ( 33 )        "Mayor sensibilidad".-

 

"La optimización del uso de pruebas en paralelo permite la detección de 2 de cada 3 tuberculina negativa, pero infectadas animales falsos que de otro modo habrían permanecido en el rebaño si la prueba de la tuberculina solo había sido utilizado"

 

- 7.3.3.3.- Programa Erradicación Tb Bovina Irlanda 2016-18 "La experiencia ha demostrado que el uso estratégico de las pruebas gamma a menudo puede ser tan eficaz como la despoblación manada completa en cuanto a la limpieza de una manada de infección sin la necesidad de matar animales no infectados sanos."

 

- 7.3.3.4.- Presentación de Thermofisher.- ( 34 )

 

En esta presentación del kit Bovigam para Tuberculosis Bovina, Thermo Fisher, estima en un máximo del 7% de animales infectados el nº de animales que su kit Bovigam podría dejar de detectar, mientras la prueba de la piel podría dejar de detectar hasta un 25%. Por tanto es mucho más sensible el gamma- interferón que la prueba de la piel.

 

- 7.3.3.5.- Estudio de campo hecho en España en 1995 sobre la sensibilidad del test en comparación con el de la prueba intradermica simple.-

 

"En España evaluación del ensayo indicó que el rango de sensibilidad relativa para el IFN γ ensayo fue de 81,4% -92,4% en comparación con 67,7% -81,9% para una sola prueba de la tuberculina intradérmica (Domingo, et al., 1995)" (  3 )  referencia "sensibilidad en España 1995"

 

7.3.4.- Acortar cuarentenas por Tuberculosis Bovina y recuperar la calificación tras un brote-

 

-Presentación de Thermofisher.- ( 34 )

 

Sobre los plazos para recuperar la calificación en paises donde esté permitido por la regulación, dispone de un modelo por el que en 8 días podría conseguirse frente a un mínimo de 180 mediante el uso de la prueba de la piel.

 

7.4..- Inconvenientes- Inespecificidad; "Falsos Positivos"; Relacionada con el animal: Animales jóvenes, Reacciones cruzadas otras Micobacterias, Mycobacterium Spp. Animales jóvenes, Fasciola Hepática, Inespecificidad; "Falsos Positivos"; Relacionada con el animal: Animales jóvenes, Reacciones cruzadas otras Micobacterias, Mycobacterium Spp. Animales jóvenes, Fasciola Hepática,

 

- 7.4.1.- EFSA. Opinión 2975/2012 ( 7 ) "Resumen".-

 

..."Sin embargo, teniendo en cuenta las estimaciones especificidad obtenidos, la probabilidad de que todos los animales en un rebaño probarán negativo en la prueba de IFN-γ, dado que están libres de la tuberculosis bovina, puede ser menor que cuando las pruebas de la piel se utilizan para el diagnóstico de la infección" (menos específica)

 

- 7.4.2.- EFSA. Opinión 2975/2012. ( 7 ) "Conclusiones". Respuesta a la Pregunta "R1" de la Comisión Europea sobre el uso de la prueba.

 

Sobre la idoneidad de la prueba para su uso en la Unión Europea, el gamma- interferón debía "tener especificidad no inferior a la de la prueba estándar actual con especificidad más baja utilizada en la UE"; se dice que "el análisis de los datos obtenidos para esta opinión sugieren que en algunas poblaciones de la especificidad no puede ser tan alto como el SIT la prueba estándar con la especificidad más baja utilizada actualmente en la UE." y que si "la respuesta no es negativa" ; "todavía hay incertidumbre con respecto a si la especificidad de la prueba de IFN-g basado en PPD siempre es tan alta como la de la prueba de la tuberculina actual con especificidad más baja."

 

Al respecto de ser empleada se recomienda.- "Además validación de la prueba IFN-γ debe evaluar la influencia de factores, tales como la presencia de micobacterias ambientales, la prevalencia de la tuberculosis bovina en el rebaño, la edad y la tuberculosis bovina historia prueba de los animales, y el tipo de sistema de producción, que pueden afectar a la especificidad de la prueba y por lo tanto la idoneidad de la prueba para demostrar la ausencia de la tuberculosis bovina en diferentes situaciones."

 

- 7.4.3.- EFSA. Opinión 3475/2013. "La opinión científica Opinión científica sobre los ensayos de campo para la vacunación contra la tuberculosis bovina 1 Comisión Técnica de Salud y Bienestar Animal (AHAW)" ( 48 ) 

 

"Los antígenos reactivos son comunes a los miembros de la M. tuberculosis complejo y tuberculina puede utilizarse para medir la respuesta de CMI como evidencia de la exposición a M. bovis. Sin embargo, muchos de estos antígenos también se encuentran en especies de micobacterias ambientales no patógenos y esta reactividad cruzada con antígenos comunes puede resultar en una reducción de la especificidad de la prueba, dando lugar a los reactores no específicos (falsos positivos) (Francis et al., 1978;. Monaghan et al, 1997)".

 

 

- 7.4.4.- Encuentro del grupo de Tuberculosis Bovina "TASK- FORCE" en Parma 2012 acerca de las pruebas de diagnóstico. ( 8 ) "falsos positivos"

 

"Hungría tiene una alta prevalencia de Mycobacterium spp. infecciones que causan una reacción no específica a prueba de la piel y las restricciones de sacrificio y el movimiento innecesario. Algunos rebaños infectados fueron encontrados por tanto paratuberculosis y M. bovis subsp. caprae, y, debido a la falta de diferenciación fiable, se sacrificaron todos los animales de estos rebaños. Por esta razón hay un fuerte interés en las pruebas de alta especificidad y sensibilidad."

 

-7.4.5.- VISAVET. ( 35 )           Presentación en la que explica sobre la especificidad del ensayo que ronda el 90%; que es muy sensible a ligeras modificaciones del protocolo. Que es mucho menos específico en situaciones de campo que la prueba simple de la Tuberculina y debe emplearse en rebaños infectados.

 

Explica esta presentación en otro apartado que el ensayo del gamma- interferón se ve afectado por reacciones cruzadas con otras micobacterias.

 

- 7.4.6.- Reino Unido: APHA: ( 28 ) "¿Qué pasa con los falsos positivos? La prueba gamma no es tan específica como la prueba cutánea de tuberculina, lo que significa que se producen más falsos positivos. Es por eso que la prueba de gamma, en la mayoría de los casos, solo se aplica a rebaños de desintegración de TB positivos para lesiones y / o cultivos. En estos rebaños, el riesgo de eliminar un número bajo de falsos positivos se ve compensado por la necesidad de identificar y eliminar todo el ganado infectado, y en cualquier caso es más probable que un animal con resultado positivo de la infección esté infectado."

 

- 7.4.7.- AVESCAL.- Sociedad Veterinaria que trabaja en el Programa en alguna región española, en esta ponencia describe procesos de respuestas inespecíficas en terneras jóvenes.¿2010? ( 36 )

 

"Terneras no infectadas con respuesta positiva (inespecífica) las IFN

 

- 7.4.8.- Carmen Casal, (VISAVET-UCM) en su Tesis Doctoral "Diagnóstico de Tuberculosis..." 2016 informa que ante determinados criterios de interpretación sobre el gamma- interferón..., ( 37 )

 

"Al analizar la edad...es destacable que los animales que reaccionaron con el C1 o el C2 fueron más jóvenes que los que reaccionaron empleando los criterios C3-C6."

 

- 7.4.9.- María Laura Mon, en su tesis "Nuevas estrategias para el diagnóstico de tuberculosis y paratuberculosis bovina" Buenos Aires. 2015   ( 38 )            explica sobre la edad y las pruebas frente a Tuberculosis.-

 

...Sin embargo, su uso (gamma- interferón) en animales jóvenes al igual en el caso de IDR puede dar falsos positivos debido a una respuesta inespecífica por parte de las células T-δ.

 

- 7.4.10.- En éste estudio, hecho en Dinamarca en 2002, ( 39 )        se concluye el riesgo de falsos positivos para gamma- interferón en animales menores de 15 meses en presencia o ausencia de paratuberculosis.

 

"Tanto en hatos libres de paraTB como infectados con paraTB, se observaron falsos positivos cuando la prueba se aplicó a terneros menores de 15 meses de edad. Hasta que se disponga de nuevas formulaciones de antígenos más específicas para estas enfermedades, la interpretación de la prueba IFN-gamma debe ajustarse individualmente para adaptarse a las necesidades específicas y al contexto en el que se aplica la prueba y, para paraTB, la prueba parece ser la más adecuada para su uso como Herramienta de apoyo para la evaluación de medidas preventivas de enfermedades en ganado joven "

 

- 7.4.11.- En el estudio "Evaluación de pruebas de diagnóstico para la tuberculosis bovina en la parte sur se Alemania" ( 14 ) "Factores Falsos Positivos" se explica que.-

 

"Los factores que afectan el anfitrión y pueden influir en el resultado del ensayo Bovigam® podría ser un precedente realizado intradermotuberculinación, la raza, una infección con Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis ( MAP) o una infección con F. hepatica ( Amos, W. et al, 2013.; Barry, C. et al., 2011; Flynn, R., J. et al., 2007; Schiller, I. et al., 2010b)"

 

- 7.4.12.- Programa erradicación TB bovina Irlanda; seleccionan los animales a los que se les prueba con gamma- interferón por edad. ( 16 ) "gamma- interferon por edad"

 

"En todos los rebaños que experimentan una crisis de alto riesgo clasificado como un desglose 'H', tras la comunicación de los reactores a la prueba de la tuberculina, la consideración (para emplear gamma- interferón) se da a tener los animales restantes, en particular la cría de animales y animales no destinados a la masacre dentro de un corto período de tiempo, un análisis de sangre por lo que serán eliminados que los animales infectados adicionales."

 

- 7.4.13.- En el trabajo "aplicación exitosa del ensayo de interferón gamma en un programa de erradicación de la tuberculosis bovina: La experiencia Taurino manada Francés"2004-2014 ( 50 )       parecen haber examinado solo los animales de mas de dos años de edad y explican que en animales jóvenes menores de año y medio es arriesgado su empleo por generar falsos positivos y que tambien hay factores locales desconocidos que podrían ser micobacterias ambientales de zonas humedas que habrian influido en el diagnostico con gamma- interferon.

 

"..rendimiento en el campo del ensayo y los resultados de los controles de calidad también se evaluaron utilizando los datos de dos mundial de selección progra- mas realizados en 2009-2011 (14.199 animales) y 2012-2014 (17.534 animales) en todos los rebaños (más de 2 años de edad animales) ."

 

"Esta alta especificidad podría en parte ser debido a la baja producción de gamma-IFN por las células T de este tipo de animales, pero también a la menor exposición del ganado a micobacterias no tuberculosas en el entorno bastante seco en el periodo cuando los animales se muestrean para el cribado (en su mayoría, de septiembre a noviembre). De hecho, la proporción de ensayo IFN reacciones positivas falsas parece estrechamente relacionada con el área agrícola (...). También se observó una mayor frecuencia de reacciones no específicas en animales jóvenes, lo que contrasta con los resultados de Gormley et al. ( ...).

 

Estos resultados se podrían explicar por la presencia de una mayor proporción de las células asesinas naturales en la sangre periféricas de animales jóvenes (<18 meses), que puede ser una fuente de producción innata gamma-IFN ( ...).

 

De hecho pastos machos, que son generalmente de mejor calidad de los utilizados para las hembras, pueden estar situados en las zonas más húmedas donde micobacterias no tuberculosas que conduce a estas reacciones no específicas son frecuentes (...)

8.- Momento de extracción de la sangre si se hace en paralelo o serie y como podría afectar al resultado

 

- En el programa español, donde solo se contempla el uso en paralelo junto con la tuberculina, la muestra de sangre se debe extraer el primer día que se va al campo justo antes de inocular la Tuberculina. Manual MAPAMA ( 40 )

 

- 8.1.- EFSA. Opinión 2975/2012 ( 7 ) "Momento Extracción".-

 

..."La sangre para el análisis puede ser recogida de los animales antes de la prueba de la piel o después de que se realiza el examen de la piel (por lo general el día se lee la prueba, 72 horas después de la inoculación intradérmica de PPD). Esto puede tener un efecto modulador inmune en términos de la liberación de IFN-γ específico que puede ser reflejado en el resultado de la prueba (Whipple et al, 2001;.. Gormley et al, 2004;. Whelan et al, 2004; Schiller et al. , 2010c)."

 

- 8.2.- USDA. Departamento Agricultura Estados Unidos. ( 7 ) "Momento Extracción".-( 13 )

 

..."entre 3 y 30 días tras la inyección de la tuberculina en la zona ceudal"

 

- 8.3.-Nueva Zelanda.- Documento informativo sobre el empleo del Bovigam "Antígenos Especiales" ( 41 )

 

"El resultado de este trabajo es que la prueba Bovigam® se ha determinado que tienen una sensibilidad mejorada en la forma anterior de la prueba y equivalente especificidad proporcionado la sangre para la prueba se toma entre 13 y 33 días desde la fecha de la prueba de la tuberculina es aplicado."

 

 

- 8.4.- En el estudio "Evaluación de pruebas de diagnóstico para la tuberculosis bovina en la parte sur se Alemania" ( 14 ) "Factores Falsos Positivos" se explica que.-

 

"Entre los factores influyentes discutidos en la literatura una prueba de piel realizado previamente se discute a tener un efecto sobre la especificidad de la Bovigam 1 ensayo. En nuestro estudio se llevó a cabo la prueba STIC (Intradermotuberculinización) dos a 28 (media de 8,45 días) días anteriores a la Bovigam 1 ensayo"

 

- 8.5.- Reino Unido. Empleo del gamma- interferon. ( 42 )

 

"Si la prueba gamma se realiza al mismo tiempo que la prueba cutánea, la muestra de sangre se toma antes de las inyecciones de tuberculina el día 1 de la prueba (TT1) o después de la lectura de la prueba cutánea el día 2 de la prueba ( TT2)"

 

- 8.6.- Irlanda. Empleo del gamma- interferon. Pruebas en paralelo y en serie control calidad. ( 43 )

 

"(1) Las pruebas de diagnóstico (en paralelo): La prueba de IFN se llevó a cabo en muestras de sangre recogidas contemporáneas (ya sea justo anteriores o posteriores) a una SICTT en animales no del reactor mientras que el rebaño fue restringida debido a bTB. "

"(2) pruebas de control de calidad: La prueba se realizó IFN en muestras de sangre recogidas, subsecuente a la SICTT en el que los animales fueron clasificados como reactor (reactor estándar o reactor concluyentes estándar"

 

"Asimismo, no podemos descartar la posibilidad de una respuesta anamnésica IFN en los animales de control de calidad después de la inyección de la tuberculina; muestras de sangre se recogen de los animales del reactor QA normalmente dentro de 7-10 días de la inyección de tuberculina, mientras que las muestras para las pruebas de diagnóstico pueden ser recogidos dias antes, el día de inyección de tuberculina o incluso semanas después de inyección."

 

- 8.7.- María Laura Mon, en su tesis "Nuevas estrategias para el diagnóstico de tuberculosis y paratuberculosis bovina" Buenos Aires. 2015 ( 38 ) explica sobre este asunto.-

 

"...Sin embargo, fue útil en discriminar animales positivos de negativos solamente en rodeos antes de realizar la tuberculinización, ya que observaron que al realizar la tuberculinización antes de la prueba de ELISA no podían discriminar entre animales negativos de positivos probablemente debido a las sucesivas tuberculinizaciones realizadas para definir el estado libre del rodeo []. "

9.- Correlación, concordancia o grado de acuerdo con la prueba de la piel como signo de eficiencia diagnóstica.-

 

9.1.- "Rendimiento de la ensayo de interferón gamma cuando se utiliza como un diagnóstico o calidad prueba de aseguramiento de Mycobacterium bovis rebaños infectados" Clegg una , * , METRO. Bueno segundo , M. Doyle do , A. Duignan segundo , Más SJ una , E. Gormley do (Ciencia Directa-2017) ( 43 )

 

"A medida que la correlación entre IFN y los resultados de la prueba SICTT es probable que sea alta en los animales infectados ( Gormley et al., 2004 )"

 

"Entre los reactores SICTT estándar probados para control de calidad utilizando IFN a las 24 h después de la recolección de la sangre, 92,2% fueron positivos para ambas pruebas."

 

9.2.- A la pregunta instructiva ¿Qué hay de más resultados positivos después de un IFN prueba de la piel?, la APHA de Reino Unido responde.- ( 28 )

 

• Infección residual, o la reintroducción de la infección pueden causar más de prueba positivos aguas abajo

• Las pruebas cutáneas y IFN identifican ligeramente poblaciones diferentes individuos infectados.

• En general, en un grupo de pacientes infectados confirmados, mientras que la mayoría de los animales infectados serán identificados por ambas pruebas, siempre habrá animales recogidos por una prueba pero no la otra

• Los individuos infectados en un rebaño no estarán todos en la misma etapa de la infección. Así, mientras que la eliminación de aquellos que han reaccionado a la piel o de IFN, todavía puede haber otros que apenas ahora han sido infectadas

 

9.3.- Documento donde la OIE procede a aprobar el registro del kit de diagnóstico "gamma- interferón" de Prionics en 2005. ( 44 )

 

"Características del diagnostico" Acuerdo y discrepancias; Se demostró un alto nivel de coincidencia entre Bovigam y el bio- ensayo tradicional. Bovigam demuestra una mayor sensibilidad que el bioensayo "Intradermotuberculinización comparada"...Proporción de acuerdo es alrededor del 70% por la diferente respuesta inmune ante el diferente sistema de prueba...

 

En los datos aportados, la correlación en bovino varía entre un 75 y un 95%.

 

9.4.- Documento informativo presentación de Termofisher donde se exponen sus especificaciones. ( 21 b )

 

(En su uso en paralelo) "Hasta el 25 % de los reactores son detectados exclusivamente por gamma- interferón mientras que solo un 7% es de esperar sean detectados solo por la prueba de la Tuberculinas"

 

9.5.- Encuentro del grupo de Tuberculosis Bovina "TASK- FORCE" en Parma 2012 acerca de las pruebas de diagnóstico. ( 8 )

 

"correlación en Hungria""Hasta ahora (en Hungria) prueba BA IFN-γ se ha utilizado en un bajo número de rebaños: la razón es el alto costo que tiene que ser cubierta por el agricultor y la falta de acuerdo con los resultados de la prueba SICCT."

 

"correlación en Irlanda"."En 2010, se ensayaron 5541 animales. 1138 fueron positivos en la primera prueba de la piel. Hubo una correlación 79% entre los animales positivos prueba cutánea positiva y IFN-gamma. De 287 animales con lesiones clínicas, 257 (90%) también eran IFN-γ positivo."

 

9.6.- En el congreso de la Asociación Nacional de Especialistas en Medicina Bovina de España (ANEMBE), celebrado en Pamplona en 2017 ( 2 ), en la sesión sobre Tuberculosis Bovina, el catedrático y rector d ela Universidad de León, D. Juan Francisco García Marín se manifestaba de la siguiente forme sobre la necesidad de coincidencia entre los bovinos positivos a ambas pruebas y del significado de que no haya coincidencia.-

 

"Para realizar la prueba del gamma- interferón tiene que haber una coincidencia en animales del 80 o 90% con la tuberculina simple o con la comparada, si se utiliza gamma- interferón comparad. Cuando no lo hay es que se está haciendo una interpretación errónea."

 

 

9.7.- Resultados programa erradicación de Nueva Zelanda 2014-15. ( 45 )

 

Un 99,7% de los animales negativos en piel resultan a su vez negativos a sangre.

 

"Además, auxiliar interferón gamma paralelo (Bovigam ©) las pruebas se realizaron en 32.940 ganado que presenten resultados negativos en la prueba cutánea primaria para la tuberculosis, pero eran parte de un rebaño infectado. De éstos, 87 (0,3%) dieron positivo y fueron sacrificados como reactores de TB. En masacre, se encontró que 24% de estos reactores de TB tener lesiones macroscópicas de TB en masacre, o M. Bovis"

 

Junto con las pruebas en paralelo, Nueva Zelanda emplea la prueba auxiliar gamma- interferón tambien en serie a los animales positivos a la prueba de la piel.

 

9.8.-María Laura Mon, "Nuevas estrategias para el diagnóstico de tuberculosis y paratuberculosis bovina" Buenos Aires. 2015 ( 38 ) explica sobre este asunto.-

 

"...Entre las proteínas testeadas, la quimera de ESAT-6/MPB70/MPB83 demostró, al ser implementada en la prueba de ELISA, una correlación satisfactoria con la IDR doble comparativa (índice kappa: 0.688), reflejando una sensibilidad de 83.2% y una especificidad de 86.5%..."

10.- Uso en paralelo o en serie de la prueba auxiliar gamma- interferón.

 

Ya se ha tratado en los puntos 2 y 3 los usos y regulación en diversos paises y en el 4 ciertas experiencias sobre su uso.

 

En la Unión Europea, esta prueba auxiliar está prevista para emplearse en paralelo para "maximizar la detección de animales infectados o enfermos de un rebaño" en animales que han reaccionado de forma negativa a la prueba de la piel pero forman parte de un rebaño infectado.

 

No obstante, tambien en animales de rebaños no infectados que reaccionan de forma positiva a la prueba de la piel, como medida de mejorar la especificidad del diagnóstico y como alternativa al empleo de la prueba de comparación viene siendo empleada por varios paises de la UE ( 46 )           y ha sido recomendada por la EFSA ( 47 )            "cuando la manada se acerca a la libertad de bTB, la gran mayoría de los animales positivos será falsos positivos y resultar negativo en el post-mortem....la especificidad de pruebas podría ser aumentado (por ejemplo, uso de las pruebas de serie único intradérmica de tuberculina cervical comparativa (SICCT)"

 

Fuera de la Unión Europea tambien se usa en serie en paises como Nueva Zelanda para hacer un segundo cribado y reducir en un factor de 100 a 4 el número de "Falsos Positivos" ( 45 ) bajo una serie de condiciones en algunos supuestos. ( 41 )

 

11- Modificación del punto de corte y antígenos definidos o específicos; clave para las pruebas DIVA que permitan la vacunación de Tuberculosis y Paratuberculosis y para la mejora en todo caso de la precisión diagnóstica.

 

- 11.1.- Ya la Comisión Científica Veterinaria de la UE en 1999 ( 3 ) preveia que el empleo de antígenos mejoraría su rendimiento futuro.

 

"Los avances en la comprensión de doble primeras respuestas inmunitarias a bovina M. bovis infección y el reconocimiento de la novela y específicos antígenos inmunodominantes (Pollock y Andersen, 1997a; 1997b) debe resolver algunas de las reservas existentes sobre el uso in vitro ensayos y también sobre su especificidad."

 

- 11.2.- En el documento "Opinión científica sobre los ensayos de campo para la vacunación contra la tuberculosis bovina" de la AHAW de la EFSA se profundiza en el empleo de antígenos definidos con varios objetivos, como la discriminación de animales vacunados infectados o no y para la mejora de la precisión diagnóstica.- ( 48 )

 

"...antígenos de micobacterias definidos, tales como ESAT-6 y CFP-10 se incluyen en el ensayo DIVA como la estimulación de antígenos, y sirven para aumentar la especificidad de la prueba (Pollock y Andersen, 1997; Aguas et al, 2004;. Aagaard et al., 2006) como estas proteínas están codificadas por genes ausentes de casi todos micobacterias ambientales (Hughes et al., 2005)". (Cita 1)

 

- 11.3.- En la presentación de Termofisher sobre el gamma- interferón, ( 34 ) se ofertan dos tipos de gamma- interferón junto con el clásico que incluye proteinas bovina. Cada uno de estos tres presentan diferentes rendimientos en cuanto precisión o niveles de sensibilidad y especificidad; El clásico con PPD bovina (Tb PPD) tiene una se. del 89% y una especificidad del 84%. El PC-EP con una se. Del 80 y una sp. del 97% y el PC-EH con una sensibilidad del 85% y una especificidad del 94% y recomiendan los supuestos en que debe emplearse cada uno de ellos.

 

- 11.4.- De igual modo, el programa de Nueva Zelanda, en éste documento explicativo del uso del gamma- interferón explica las políticas de uso incluyendo el de antígenos definidos en algunos supuestos. ( 41 )

 

- 11.5.- En este estudio hecho en Francia en 2011, la modificación del punto de corte en gamma- interferón empleando antígenos PPD tradicionales y antígenos específicos para adaptarlo a dos supuestos como "alto riesgo" y "bajo riesgo" permite mejorar en unos casos la sensibilidad y en otros la especificidad, concluyendo el estudio que "la adaptación de los criterios de interpretación al estado de infección de la región y a las condiciones para su aplicación es esencial para el uso apropiado del ensayo del gamma- interferón." ( 49 )

 

- 11.6.-En este otro estudio hecho tambien en francia ( 50 ),           se comenta que "Un inconveniente importante de la técnica podría ser una menor especificidad que puede superarse parcialmente mediante el uso de antígenos recombinantes, tales como ESAT-6 o CFP10 Aunque a costa de una sensibilidad reducida."

 

- 11.7.- María Laura Mon, "Nuevas estrategias para el diagnóstico de tuberculosis y paratuberculosis bovina" Buenos Aires. 2015 ( 38 ) explica sobre este asunto.-

 

"Entre las proteínas testeadas, la quimera de ESAT-6/MPB70/MPB83 demostró, al ser implementada en la prueba de ELISA, una correlación satisfactoria con la IDR doble comparativa (índice kappa: 0.688), reflejando una sensibilidad de 83.2% y una especificidad de 86.5% "

"Las proteínas antigénicas ESAT-6 y CFP10 son sin duda los antígenos mejor caracterizados, los genes codificantes se encuentran en la región RD1 ausente en la cepa vacunal M. bovis BCG y en la mayoría de las micobacterias ambientales, con lo cual permiten diferenciar animales vacunados con BCG de infectados con M. bovis [188]; por otra parte, en MAP tampoco están presentes las proteínas ESAT-6 y CFP-10, permitiendo también diferenciar animales con TBB de PTB".

 

 

En el trabajo hecho en 2016 por NEIKER, ( 51 )          en colaboración con la APHA y el SERIDA "La detección de la tuberculosis en la paratuberculosis Vacunados Terneros: NewAlternatives contra las interferencias" concluyen que.-

 

"Nuestros resultados demuestran que la ESAT-6 / CFP10 y proteínica Rv3615c y cócteles peptídicos se pueden utilizar como reactivos de ensayo de la piel en la cara de la vacunación PTB y M. bovis infección sin comprometer ni Se o Sp. Con respecto a IFN-gamma resultados, el uso de estos antígenos definidos mejoró el Se y Sp en comparación con los antígenos convencionales A-PPD y B-PPD. En conclusión vacunación PTB produce interferencia en el ganado infectados experimentalmente con M. Bovis, pero esto podría superarse si las nuevas estrategias de ensayo, tales como nuevos antígenos específicos se aplicaron alternativa o como complemento de las pruebas de diagnóstico oficiales BTB o si se establecieron nuevos criterios de diagnóstico con antígenos tradicionales"

 

- 11.8.- Sobre la posibilidad de emplear la prueba d ela Tuberculina para esta discriminación.-

 

"Con respecto a las lecturas relativas, para la SIT, una línea de corte en un aumento de la piel 100% clasifica todos los animales en el VAC / Infec como bTB positivo, mientras que todos en el grupo VAC / NIN fueron clasificados como reactores no BTB. Esto produjo 100% de Se y el 100% Sp . Una lectura comparativa, anotando un aumento relativo B-PPD como positivo mayor que el aumento de A-PPD, también produjo 100% de Se y Sp."

 

- 11.9.- Bernat Perez de Val, en 2013 hizo un trabajo denominado "Nuevas estrategias vacunales y diagnosticas para el control de la Tuberculosis" en caprino ( 52 )              y concluye entre otras cosas que.-

 

"La vacunación contra Mapa representa un avance importante en el control PTB y mejorar el equilibrio económico de las explotaciones afectadas." "Esta investigación ha dado lugar a la identificación de varios antígenos, tales como ESAT-6, PPC- 10, y Rv3615c, que reducen las respuestas inmunes de reactividad cruzada para diferentes infecciones micobacterianas o vacunas en ganado (Vordermeier et al, 2001;. Cockle et al, 2006;. Sidders et al,. 2008) y cabras (Bezos et al, 2011;. Pérez de Val et al, 2012)""En el presente estudio, hemos demostrado la capacidad tanto de E / C y Rv3615c para distinguir PTB-vacunados y cabras infectadas con tuberculosis"

 

- 11.10.- Reino Unido, tambien emplea esos antígenos específicos pero en pruebas voluntarias de dos tipos. En una de ellas, los antígenos que se disponen permiten mayor seguridad de que se hallará infección de estar presente (más sensibles para comprar un semental o animales de alto valor) y en otra se prima la especificidad, para asegurarse de que no sacrificamos un animal sano. Reino Unido tambien emplea el criterio de "rebaños contiguos" a afectos de incrementar la presión diagnóstica. "análisis de sangre interferón-gamma ¿Qué es y por qué usarlo? " 2018. APHA. Reino Unido. ( 24 )

 

- 11.11.- Dictamen 12/16 del Comité Científico de la Agencia Federal Belga para la seguridad de la cadena alimentaria. ( 53 )           "Evaluación del programa de control de la tuberculosis bovina belga" Punto 4.3.3. "prueba de IFN-y basado en antigenos especificos"

 

"el uso de un solo antígeno reduce al mínimo la cantidad de reactores de falsos positivos en animasl no infectadas (antígeno solo tiene un Sp mayor en comparación con PPD). La combinación de epítopos de diferentes antígenos aumenta el Se diagnóstico sin comprometer la (Tabla Cf. Sp"

 

"EFSA recomienda utilizar la prueba IFN-γ, ya sea simultáneamente o en paralelo con la prueba de la piel." En serie.- "con el fin de aumentar la especificidad del protocolo de diagnóstico en general. La UE regulación, sin embargo, no incluye este uso de serie de la prueba de IFN-γ (EFSA, 2012a)."

 

"La prueba de IFN-γ se utiliza en las pruebas de serie cuando existe la preocupación de que la prueba ante mortem rutina carece por ejemplo especificidad donde se realiza la SIT o en áreas donde hay una baja probabilidad de que los animales que son realmente infectados (como en Bélgica, donde relativa alta se observa la prevalencia de la infección por MAP (. Van der Stede et al, 2010;. Boelaert et al, 2000)."

 

REFERENCIAS

 

 

1.-Pregunta escrita E-1068/00 de la europarlamentaria irlandesa Avril Doyle, perteneciente al grupo del Partido Popular Europeo a la Comisión sobre la inclusión del gamma- interferón en las pruebas de diagnóstico frente a Tuberculosis Bovina en la Unión Europea y respuesta del Comisario Sr. Byrne del 11 de mayo de 2000.

2.- Entrevista al doctor D. Juan Francisco García Marín en el nº 138 de la revista AFRIGA sobre ciertas cuestiones que se les fueron planteadas a los integrantes del debate celebrado en la asamblea anual de la asociación de médicos veterinarios bovinos (ANEMBE) celebrada en 2017 en Pamplona sobre Tuberculosis Bovina.

 

3.- Informe del Comité Científico de la Salud y Bienestar de los Animales (11/10/99) de la D. G. de salud y protección de los consumidores. SANCO / B3 / R10 / 1999 sobre "Modificación de Anexos técnicos de la Directiva 64/432/CEE del Consejo para tener en cuenta los avances científicos en materia de Tuberculosis, Brucelosis y Leucosis Bovina Enzóotica.

4.- Reglamento (CE) Nº 1226/2002 de la Comisión de 8 de julio de 2002 por el que se modifica el anexo B de la Directiva 64/432/CEE del Consejo. Diario Oficial de las Comunidades Europeas L 179/13.

5.- Programa Nacional Erradicación Tuberculosis Bovina España 2007. MAGRAMA.

 

6.- Resolución nº 34 de la Oficina Internacional de Epizootias (OIE) sobre Registro de kits de diagnóstico validados y certificados por la OIE, por el que la Comisión de Normas Biológicas de la OIE consideran el Kit BOVIGAM 1 Mycobacterium bovis Gamma interferon test kit for cattle de Prionics AG como apto para determinados fines en todo el mundo. Publicado en mayo 2015.

7.- Opinión Científica de la EFSA nº 2975/2012 sobre el empleo del Gamma- interferón en el diagnóstico de Tuberculsis Bovina.

8.- Publicación con reportaje técnico de la Reunión técnica de la Red Científico de la EFSA para la evaluación del riesgo en Salud y Bienestar animal sobre las Pruebas de Tuberculosis Bovina. Publicación de apoyo 2012: ES-288. Parma a 21 de febrero de 2012.

9.- Informe Final de una Auditoría (corregido) efectuada en España en 2016 para evaluar la eficacia del programa cofinanciado por la Unión Europea para erradicar la Tuberculosis Bovina y los progresos realizados por dicho programa. Tribunal de Cuentas. Dirección General de Salud y Seguridad Alimentaria. Comisión Europea. Docº Ares(2016)7136910-22/12/2016 / DG (SANTE) 2016-8771 – MR

10.- "Dudas, preguntas y respuestas sobre la Tuberculosis Bovina. Consejería de Agricultura, Pesca y Desarrollo Rural de la Dirección General de la Produccion Agrícola y Ganadera. ¿2012?.

 

11.- Directiva del Consejo de 26 de junio de 1964 (64/432/CEE) relativa a problemas de policía sanitaria en materia de intercambios intracomunitarios de animales de las especies bovina y porcina. (DO 121 de 29.7.1964, p. 1977/64)

12.- Manual para la realización de procedimiento de prueba IDTB de comparación y del gamma- interferón. MAGRAMA. España 2006.

13.- Actualización del Programa Nacional de Erradicación de la Tuberculosis Bovina en los Estados Unidos. Mark Schoenbaum. Epidemiólogo nacional de salud del ganado Departamento Agricultura USDA. 2018.

14.- "Evaluación de pruebas de diagnóstico para la Tuberculosis Bovina en la parte sur de Alemania": Un análisis de clase latente. Valerie- Beau Pucken. 2018.

15.- "Evaluación del rendimiento de la prueba de IFN-gamma Idvet para el diagnóstico de la Tuberculosis Bovina en España. Varios VISAVET. Universidad Complutense de Madrid. Facultad Veterinaria. Septiembre 2018

16.- Programa Erradicación Tuberculosis Bovina en Irlanda 2016 – 2018 aprobado para su cofinanciación por la Unión Europea. Departamento de Agricultura Irlanda.

17.- Multimedia con la intervención del Licenciado en Veterinaria don Alfonso Monge, cofundador de ANEMBE, en el congreso de ANEMBE 2017 celebrado en Pamplona en el debate sobre Tuberculosis Bovina en España y sobre determinados requisitos que deben tenerse en cuenta a la hora de emplear el gamma- interferón en su diagnóstico. Productora; Vaca TV.

18.- Multimedia con la intervención del Licenciado en Veterinaria perteneciente al cuerpo de Veterinarios Oficiales del Estado y Director de las Campañas de Saneamiento en España don José Luis Sáez, en el congreso de ANEMBE 2017 celebrado en Pamplona en el debate sobre Tuberculosis Bovina en España y sobre determinados requisitos que deben tenerse en cuenta a la hora de emplear el gamma- interferón en su diagnóstico. Productora; Vaca TV.

19.- Directiva del Consejo de 26 de junio de 1964 (64/432/CEE) Versión Italiana.

20.- Directiva del Consejo de 26 de junio de 1964 (64/432/CEE) Versión Española.

21.-Instructivo sobre el uso e interpretación de pruebas de diagnóstico de campo para Tuberculosis Bovina. Gobierno de Chile. 2009.

21 b) Presentación de Termofisher. Sensibilidad y especificidad de diversas pruebas.

22.- Programa Nacional Erradicación Tuberculosis Bovina España 2015-16. MAGRAMA.

23.- Programa Nacional Erradicación Tuberculosis Bovina España 2015-16. MAGRAMA.

24.- Multimedia. Intervención de la EXCMA. Consejera de Agricultura de la Junta de Andalucía. Soña Camrmen Ortiz en el Parlamento Andaluz el 13 de octubre de 2016 a petición del Grupo Podemos promovido por la ADSG "Sierra Oriental de Huelva"

25.- Decisión de subvención SANTE/2018/ES/SI2.774130 de la Comisión Europea al Programa Nacional Erradicación Tuberculosis Bovina España 2018. Nº de pruebas gamma- interferón.

26.- Decisión de subvención de la Comisión Europea al Programa Nacional Erradicación Tuberculosis Bovina Irlanda 2016- 18. Nº de pruebas gamma- interferón.

27.- Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008. Capítulo 2.4.7. Tuberculosis Bovina.

28.- Análisis de sangre gamma- interferón. ¿Qué es y porque usarlo? Agencia para la salud de las plantas y animales. APHA. Reino Unido. UK.

29.- Programa Local Erradicación Tuberculosis Bovina Córdoba 2006. Junta Andalucía

 

30.- Herramientas disponibles para Tuberculosis Bovina: Fortalezas y debilidades. Julio Alvarez -VISAVET-Universidad Complutense Madrid 2011.

31.- Diagnostico y epidemiologia TB bovina. Lucas Dominguez. -VISAVET- Universidad Complutense Madrid 2

32.- "Actitudes de los ganaderos y veterinarios frente al programa de erradicación de la Tuberculosis Bovina en España. ¿Qué está pasando en el campo? (FICHA RESPUESTAS) (2017) Andalucía y Cataluña.

33.- Documento SANCO 10200/2006, subgrupo en Tuberculosis Bovina de la Unión Europea "TASK- FORCE"

34.- Uso del gamma- interferon en el diagnostico de tuberculosis bovina. C. Lucía Favila. Thermo Fisher Scientific. ¿2016?

35.- Desarrollo actual en el diagnostico de la tuberculosis. Lucía de Juan. VISAVET. Universidad Complutense Madrid.¿2015?

36.- Diagnóstico de campo y matadero. Alberto Parra. AVESCAL S. C. 2007

37.- Diagnostico de Tuberculosis..."Carmen Casal Comendador. VISAVET. Universidad Complutense Madrid. 2016.

38.- Nuevas estrategias para el diagnóstico de tuberculosis y paratuberculosis bovina" María Laura Mon, Buenos Aires. 2015

39.- Interpretación de la prueba de interferon- gamma para el diagnostico de paratuberculosis subclinica en bovinos. Jungersen, G / Huda A / Hansen JJ, Lind P Instituto Danés de Veterinaria. 2002

40.- Manual de las pruebas de intradermotuberculinización y gamma- interferon. Programa Nacional Erradicación Tuberculosis Bovina 2015-16- España. MAGRAMA.

41.- Documento informativo empleo gamma- interferon y los antigenos especiales en Nueva Zelanda. 2017.

42.- Guia sobre el uso del gamma- interferon en ganado. WEB tbhub Reino Unido. 2018.

43.- Rendimiento del ensayo de interferon- gamma cuando se utiliza como un diagnostico o calidad de prueba para el aseguramiento de la infección de M. Bovis en rebaños infectados. Bueno / Clegg / Doyle / Dulgan / Mas. SJ / E.Gormley.

44.- Informe (y evaluacion) aportado por Prionics sobre su kit "BOVIGAN- Mycobacterium bovis Gamma Kit prueba de interferon para ganado" ante el Procedimiento de la OIE para el registro de kits de diagnostico. 2015.

45.- Programa erradicación tuberculosis bovina Nueva Zelanda. 2014-15.

46.- Vigilancia de la tuberculosis bovina en bovinos y en libertad. vida silvestre en los Estados miembros de la UE en 2013: una revisión basada en una encuesta. J.Riviere. K. Carabin . Y. Le Strat. P. Hendrikx. B. Dufour. 2013.

47.- La opinión científica Declaración relativa a un marco conceptual para la tuberculosis bovina. Comisión Técnica de Salud y Bienestar Animal (AHAW) Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA), 2013

48.- La opinión científica Opinión científica sobre los ensayos de campo para la vacunación contra la tuberculosis bovina 1 Comisión Técnica de Salud y Bienestar Animal (AHAW) 2013.

49.- Determinación de los valores de corte de decisión para el diagnostico optimo de la tuberculosis bovina con un ensayo de IFNy modificado (BOVIGAMr) en un area de baja prevalencia den Francia. Faye. S.-Moyen. JL-Gares. H. - Garin bastug B.-Boschiroli ML 2011.

50.- Apliación exitosa del ensayo de interferon gamma en un sistema de erradicación de tuberculosis bovina: La experiencia de rebaños de ganado bravo en Francia. (La Camarga) Nicolas Keck 1, Maria-Laura Boschiroli 2 *, Florencia Smyej 3, Valérie Vogler 4, Jean-Louis Moyen 5 y Stéphanie Desvaux 6 2004-2014

51.- La detección de la tuberculosis en la paratuberculosis Vacunados Terneros: NewAlternatives contra las interferencias MiriamSerrano 1, Natalia Elguezabal 1, Iker A. Sevilla 1, Mari 'un V. Geijo 1, Elena Molina 1, Rakel Arrazuria 1, Alfonso Urkitza 2, Gareth J. Jones 3, Martin Vordermeier 3, Joseba M. Garrido 1 *, Ramo'n A. Juste 1,4--.2017

52.- Nuevas Estrategias Vacunales y Diagnosticas ara el control de la tuberculosis. El modelo caprino. Bernat Pérez de Val. Jul 2013.

53.- "Evaluación del programa de control de la tuberculosis bovina belga". Comité Científico de la Agencia Federal Belga. 2016.

 

 

 

 

 

 

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